一、培養體系問題

1、檢查細胞是否存在污染。

(1)如果培養細胞時未添加抗生素，細胞污染則是不可避免的。

①用肉眼和顯微鏡進行檢查。

②如果細胞被污染則要棄掉。

(2)支原體污染不易察覺，因此需要進行定期檢測。

(3)檢查可能造成污染的途徑和原因。

2、檢查用于培養細胞的培養基和血清(例如批次廠商是否相同)。

3、如果排除問題與培養基無關，那么可能還是細胞存在問題。

(1)復蘇另一支凍存的細胞，與正在培養的細胞進行比較。但是需要注意的是兩種細胞的培養應分開，以免在培養之初就產生污染。隨后按步驟(2)～(4)的方法做排查。

(2)對傳代培養的細胞進行計數，并繪制生長曲線，與前面培養該細胞的資料進行比較，檢查是否存在如下改變：

①傳代時是否存在接種密度過低的情況。

②細胞傳代是否過于頻繁。

③傳代前細胞平臺期是否過長。

(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批次，檢查供應商和批次。

(4)細胞分離過程中是否出現嚴重損傷細胞的情況：

①胰蛋白酶(或其他消化試劑)的消化時間是否過長。

②消化液的濃度和活性是否過高、過強。

③胰蛋白酶消化時，孵箱溫度是否正常。

④吹打消化細胞時是否過于用力。

⑤如果添加了EDTA，那么細胞是否對 EDTA過于敏感。

⑥胰蛋白酶稀釋是否正確。

⑦胰蛋白酶消化液是否還在有效期內。

二、檢查公用設備和試劑

1、孵箱溫度設定不準

a、自動調溫器損壞。

b、開關孵箱門過于頻繁。

c、孵箱門未關緊。

d、風扇損壞造成散熱不均。

2、孵箱濕度不能維持

a、水盤中未加水。

b、孵箱有滲漏。

c、開關孵箱門過于頻繁。

d、在培養皿中放置一定量的PBS，每日稱重，以檢查蒸發率。

3、孵箱的CO₂濃度不準

a、開關孵箱門過于頻繁。

b、CO₂控制器出現問題。