(本中文說明書為翻譯稿，僅供參考，應以英文版為準)

貨號：3091314 (Sigma-Aldrich : GAGO20)

儲存溫度：2-8℃

產品描述：

酶作為一種分析工具，在食品、生化和制藥工業中得到了廣泛的應用。酶的方法是特異性的，可重復的，靈敏的，快速的，因此，是分析目的的理想方法。由于酶的高特異性和敏感性，定量分析可以在很少或沒有樣品準備的情況下進行^1-5。

本試劑盒用于食品和其它材料中葡萄糖的定量、酶法測定。各種出版物已經報道了在不同的系統和樣本上使用該試劑盒，包括果蠅^6-8、牛糞⁹、培養的小鼠肌肉細胞¹⁰、HEPG2細胞¹¹和水生生物¹²。

原理：

• 葡萄糖氧化酶將葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫。

• 過氧化氫在過氧化物酶的存在下與鄰二苯胺反應生成有色產物。

• 氧化的鄰二苯胺與硫酸反應生成更穩定的有色產品。

• 在540 nm處測得的粉紅色的強度與原始葡萄糖濃度成正比。

試劑盒組成：

1、葡萄糖氧化酶/過氧化物酶試劑

• 將未打開的試劑盒試劑保存在2-8℃。每個膠囊包含500單位的葡萄糖氧化酶(黑曲霉)，100單位(purpurogallin units)的過氧化物酶(辣根)和緩沖鹽。

• 將膠囊內容物倒入琥珀色的瓶子中。

• 將這些物質溶解在39.2 mL去離子水中。

• 該溶液在2-8℃最多穩定一個月，在-20℃冷凍至少六個月。

• 如果出現渾濁，請丟棄。

2、鄰二苯胺試劑

• 將未打開的試劑盒試劑保存在2-8℃。盡量減少曝光。預先稱量的小瓶中含有5毫克的鄰二苯胺鹽酸鹽。

• 用1.0 mL的去離子水重新配制鄰二苯胺小瓶的內容物。

• 翻轉樣品瓶幾次以溶解。

• 避免將試劑暴露在光線下。

• 溶液在2-8℃下穩定3個月。

3、分析試劑

• 向裝有39.2 mL葡萄糖氧化酶/過氧化物酶試劑的琥珀瓶中加入0.8 mL鄰二苯胺試劑。

• 將瓶子倒過來幾次混合。

• 盡量減少暴露在光線下。

• 溶液在2-8℃下穩定1個月。

• 如果出現渾濁或其他顏色，請丟棄。

4、葡萄糖標準溶液

• D-葡萄糖，在0.1%的苯甲酸中為1.0 mg/mL。

• 該標準可追溯到NIST標準，并提供即用型。

• 在2-8℃穩定至少六個月。

• 如果出現混濁，請丟棄。

必需但未提供試劑：

硫酸，ACS試劑，為18M硫酸試劑。在去離子水中準備6M溶液。

儀器：

1、分光光度計或比色計：可在540nm下測定吸光度。

2、比色皿。

3、試管，18 mm×150 mm

4、移液器：能夠準確分配20 μL至2.0 mL的體積。

5、能保持溫度在37℃的水浴鍋

注意事項和免責聲明：

本試劑僅供科研使用，不能用于藥品、家庭以及其他用途。有關危險和安全操作規程的信息，請參閱安全數據表。

操作步驟：

樣品制備：

液體：

• 用去離子水將樣品稀釋至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。

• 如有必要，對溶液進行過濾或去蛋白處理以使其澄清。

• 樣品葡萄糖含量較低且顏色較深時，應予以脫色處理。

• 含碳酸或發酵樣品，須脫氣處理。

固體：

• 稱量0.1mg樣品。

• 用去離子水提取樣品。可以將溶液加熱(<75℃)以幫助萃取。

• 用去離子水稀釋提取液品至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。

• 如有必要，對溶液進行過濾或去蛋白處理以使其澄清。

測定：

方法1：標準曲線中的葡萄糖濃度

1、吸取以下溶液到相應的試管中：

2、計時起點，通過向第一個試管中加入2.0 mL的測定試劑開始反應并混合。在向每個后續試管中添加測定試劑之間，要間隔30至60秒。

3、讓每個試管在37℃下反應30分鐘。通過在每個試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的間隔停止反應。小心地將各管徹底混合。

4、在540 nm處測量每個試管對空白試劑的吸光度。

方法2：單一標準品中的葡萄糖濃度

1、吸取以下溶液到相應的試管中：

2、計時起點，通過向第一個試管中加入2.0 mL的測定試劑開始反應并混合。在向每個后續試管中添加測定試劑之間，要間隔30至60秒。

3、讓每個試管在37℃下反應30分鐘。通過在每個試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的間隔停止反應。小心地將各管徹底混合。

4、在540 nm處測量每個試管對空白試劑的吸光度。

結果：

計算方法1：

對于標準品，繪制540 nm處的吸光度(y軸)與葡萄糖的毫克含量(x軸)標準曲線。如果標準曲線不是線性的，則結果將不準確。重復測定。

對于測試，從標準曲線確定葡萄糖毫克數。

將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中的稀釋倍數。

計算方法2：

將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中制備的稀釋倍數。

參考文獻：

1、Bergmeyer, H.U. and Bernt , E., Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, ed.). Academic Press (New York, NY), 2nd ed., pp. 1205-1212 (1974).

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