(本中文說(shuō)明書為翻譯稿，僅供參考，應(yīng)以英文版為準(zhǔn))

貨號(hào)：3091314 (Sigma-Aldrich : GAGO20)

儲(chǔ)存溫度：2-8℃

產(chǎn)品描述：

酶作為一種分析工具，在食品、生化和制藥工業(yè)中得到了廣泛的應(yīng)用。酶的方法是特異性的，可重復(fù)的，靈敏的，快速的，因此，是分析目的的理想方法。由于酶的高特異性和敏感性，定量分析可以在很少或沒(méi)有樣品準(zhǔn)備的情況下進(jìn)行^1-5。

本試劑盒用于食品和其它材料中葡萄糖的定量、酶法測(cè)定。各種出版物已經(jīng)報(bào)道了在不同的系統(tǒng)和樣本上使用該試劑盒，包括果蠅^6-8、牛糞⁹、培養(yǎng)的小鼠肌肉細(xì)胞¹⁰、HEPG2細(xì)胞¹¹和水生生物¹²。

原理：

• 葡萄糖氧化酶將葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫。

• 過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的存在下與鄰二苯胺反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。

• 氧化的鄰二苯胺與硫酸反應(yīng)生成更穩(wěn)定的有色產(chǎn)品。

• 在540 nm處測(cè)得的粉紅色的強(qiáng)度與原始葡萄糖濃度成正比。

試劑盒組成：

1、葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化物酶試劑

• 將未打開(kāi)的試劑盒試劑保存在2-8℃。每個(gè)膠囊包含500單位的葡萄糖氧化酶(黑曲霉)，100單位(purpurogallin units)的過(guò)氧化物酶(辣根)和緩沖鹽。

• 將膠囊內(nèi)容物倒入琥珀色的瓶子中。

• 將這些物質(zhì)溶解在39.2 mL去離子水中。

• 該溶液在2-8℃最多穩(wěn)定一個(gè)月，在-20℃冷凍至少六個(gè)月。

• 如果出現(xiàn)渾濁，請(qǐng)丟棄。

2、鄰二苯胺試劑

• 將未打開(kāi)的試劑盒試劑保存在2-8℃。盡量減少曝光。預(yù)先稱量的小瓶中含有5毫克的鄰二苯胺鹽酸鹽。

• 用1.0 mL的去離子水重新配制鄰二苯胺小瓶的內(nèi)容物。

• 翻轉(zhuǎn)樣品瓶幾次以溶解。

• 避免將試劑暴露在光線下。

• 溶液在2-8℃下穩(wěn)定3個(gè)月。

3、分析試劑

• 向裝有39.2 mL葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化物酶試劑的琥珀瓶中加入0.8 mL鄰二苯胺試劑。

• 將瓶子倒過(guò)來(lái)幾次混合。

• 盡量減少暴露在光線下。

• 溶液在2-8℃下穩(wěn)定1個(gè)月。

• 如果出現(xiàn)渾濁或其他顏色，請(qǐng)丟棄。

4、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液

• D-葡萄糖，在0.1%的苯甲酸中為1.0 mg/mL。

• 該標(biāo)準(zhǔn)可追溯到NIST標(biāo)準(zhǔn)，并提供即用型。

• 在2-8℃穩(wěn)定至少六個(gè)月。

• 如果出現(xiàn)混濁，請(qǐng)丟棄。

必需但未提供試劑：

硫酸，ACS試劑，為18M硫酸試劑。在去離子水中準(zhǔn)備6M溶液。

儀器：

1、分光光度計(jì)或比色計(jì)：可在540nm下測(cè)定吸光度。

2、比色皿。

3、試管，18 mm×150 mm

4、移液器：能夠準(zhǔn)確分配20 μL至2.0 mL的體積。

5、能保持溫度在37℃的水浴鍋

注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明：

本試劑僅供科研使用，不能用于藥品、家庭以及其他用途。有關(guān)危險(xiǎn)和安全操作規(guī)程的信息，請(qǐng)參閱安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟：

樣品制備：

液體：

• 用去離子水將樣品稀釋至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。

• 如有必要，對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾或去蛋白處理以使其澄清。

• 樣品葡萄糖含量較低且顏色較深時(shí)，應(yīng)予以脫色處理。

• 含碳酸或發(fā)酵樣品，須脫氣處理。

固體：

• 稱量0.1mg樣品。

• 用去離子水提取樣品。可以將溶液加熱(<75℃)以幫助萃取。

• 用去離子水稀釋提取液品至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。

• 如有必要，對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾或去蛋白處理以使其澄清。

測(cè)定：

方法1：標(biāo)準(zhǔn)曲線中的葡萄糖濃度

1、吸取以下溶液到相應(yīng)的試管中：

2、計(jì)時(shí)起點(diǎn)，通過(guò)向第一個(gè)試管中加入2.0 mL的測(cè)定試劑開(kāi)始反應(yīng)并混合。在向每個(gè)后續(xù)試管中添加測(cè)定試劑之間，要間隔30至60秒。

3、讓每個(gè)試管在37℃下反應(yīng)30分鐘。通過(guò)在每個(gè)試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的間隔停止反應(yīng)。小心地將各管徹底混合。

4、在540 nm處測(cè)量每個(gè)試管對(duì)空白試劑的吸光度。

方法2：?jiǎn)我粯?biāo)準(zhǔn)品中的葡萄糖濃度

1、吸取以下溶液到相應(yīng)的試管中：

2、計(jì)時(shí)起點(diǎn)，通過(guò)向第一個(gè)試管中加入2.0 mL的測(cè)定試劑開(kāi)始反應(yīng)并混合。在向每個(gè)后續(xù)試管中添加測(cè)定試劑之間，要間隔30至60秒。

3、讓每個(gè)試管在37℃下反應(yīng)30分鐘。通過(guò)在每個(gè)試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的間隔停止反應(yīng)。小心地將各管徹底混合。

4、在540 nm處測(cè)量每個(gè)試管對(duì)空白試劑的吸光度。

結(jié)果：

計(jì)算方法1：

對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)品，繪制540 nm處的吸光度(y軸)與葡萄糖的毫克含量(x軸)標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果標(biāo)準(zhǔn)曲線不是線性的，則結(jié)果將不準(zhǔn)確。重復(fù)測(cè)定。

對(duì)于測(cè)試，從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定葡萄糖毫克數(shù)。

將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中的稀釋倍數(shù)。

計(jì)算方法2：

將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中制備的稀釋倍數(shù)。

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